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本制品是装填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格1mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂，其作用原理是基于链霉亲和素与生物之间的相互作用，将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上，独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，纯化时需要在变性条件下洗脱；而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在pH9.5～11.0结合，pH4.0时洗脱，不需要使用变性剂，所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 生物素或生物素化物质的纯化
  结合/洗杂缓冲液：150mM NaCl，20mM NaH2PO4，pH7.4。
  洗脱缓冲液：8M盐酸胍，pH1.5。
  
• 亚氨基生物素标签物质的纯化
  结合/洗杂缓冲液：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH10.0。
  洗脱缓冲液：50mM碳酸铵，0.5M NaCl，pH4.0。

• 样品纯化(以ÄKTA为例)
  
  • 准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
    
  • 清洗：3～5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
    
  • 平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
    
  • 上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
    注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
    
  • 洗杂：用10～15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
    
  • 洗脱：用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
    
  • 清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
• SDS-PAGE检测
  将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
  注：由于盐酸胍的带电性强，会中和SDS的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析(透析可利用透析袋，PBS作为透析液，透析两次，每次1小时，透析液的体积可控制在样本的100倍)。
  
• 填料清洗
  随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。
  
  • 去除一些沉淀或变形物质
    用2倍柱体积的0.1M NaOH或6M盐酸胍或8M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。
    
  • 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
    用3～4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。